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血清的正确使用方法
2017/03/08

以下内容,根据实验室实际情况整理,仅供参考

 

1.血清必须贮存于–20-70,若存放于4,请勿超过一个月。如果一次无法用完一瓶,可将4045ml分装于无菌50ml离心管,由于血清结冻时体积会增加约10%,必须预留此膨胀体积之空间,否则易发生污染或容器冻裂之情形。

2.一般厂商提供之血清为无菌,不需再无菌过滤。若发现血清有许多悬浮物,则可将血清加入培养基内一起过滤,勿直接过滤血清。

3.瓶装(500ml)血清解冻步骤(逐步解冻法-20–704冰箱溶解一天,至室温下全溶后再分装,一般以50ml无菌离心管可分装4045ml。在溶解过程中须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一,减少沈淀的发生。勿直接由–20直接至37解冻,因温度改变太大,容易造成蛋白质凝结而发生沈淀。

4.heat-inactivation是指56,30分钟加热已完全解冻之血清。加热过程中须规则摇晃均匀。此热处理之目的是使血清中之补体成份(complement)去活化。除非必须,一般不建议作此热处理,因为会造成沈淀物之显著增多,且会影响血清之品质。补体参与之反应有:cytolytic activities,contraction of smooth muscle,release of hist amine from mast Cell sand platelets,enhancedphagocytosis,chemotaxisand activation of lymphocytic and macrophage cell type

5.勿将血清置于37太久,若在37放置太久,血清会变得混浊,同时血清中许多较不稳定之成份亦会因此受到破坏,而影响血清之品质。

6.血清之沉淀物

6.1.凝絮物:发生之原因有许多种,但普遍之原因是血清中之脂蛋白(lipoprotein)变性及解冻后血清中存在之血纤维蛋白(fibrin)造成,这些凝絮沈淀物不会影响血清本身之品质。若欲减少这些凝絮沈淀物,可用离心3000rpm,5min去除,或离心后上清液可以加入培养基中一起过滤。不建议用过滤步骤去除这些凝絮沈淀物,因为会阻塞过滤膜。

6.2.显微镜下观察之小黑点:通常经过热处理之血清,沈淀物的形成会显著的增多。有些沈淀物在显微镜下观察像是小黑点”,常会误认为血清遭受污染,而将血清放在37中欲培养此微生物“,但在37环境下,又会使此沈淀物增多,更会误认为微生物之增殖,但以培养细菌之培养基检测,又没有污染。一般而言,此小黑点应不会影响细胞之生长,但若怀疑此血清之品质,应立即停用,更换另一批号的血清。